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为探讨单宁酸对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,本试验首先采用肉汤微量稀释法检测单宁酸对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)USA300菌株的最低抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);随后采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)分析1/2 MIC浓度单宁酸对MRSA USA300代谢物的影响;最后对筛选得到的代谢物进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,进一步探讨单宁酸对MRSA的抗菌机制。结果显示,单宁酸对MRSA USA300的MIC为0.625 mg/mL,MBC为1.250 mg/mL;1/2 MIC(0.312 5 mg/mL)的单宁酸作用下筛选出7种差异表达代谢物(P<0.05,FC≥1.2或≤1/1.2)。其中,磷脂酰甘油(35:3)和2,6-二叔丁基-4-硝基苯酚表达水平显著上调(P<0.05),而(Z)-13-二十二烯酰胺、1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、2-羟基-2′-脱氧腺苷-5′-单磷酸、D-3-磷酸甘油酸和磷脂酰甘油(23:0)表达水平则显著下调(P<0.05)。通过KEGG通路富集分析发现,这些差异代谢物富集于甘油磷脂代谢、糖酵解/糖异生、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等通路;进一步根据差异代谢物的KEGG信息,绘制代谢物与通路间的调控关系网络图,发现D-3-磷酸甘油酸处于核心位置,可能是单宁酸抑制MRSA的关键代谢物。本试验结果表明,单宁酸对MRSA具有抑菌作用,其机制可能与影响甘油磷脂代谢、糖酵解/糖异生、戊糖磷酸途径、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路有关,D-3-磷酸甘油酸可能是单宁酸抑制MRSA的关键代谢物。本研究可为进一步阐述单宁酸抑菌机制提供思路。
为实现鹿茸菇多糖的高效制备,本研究系统比较了水提法、酶解辅助水提醇沉法、微波水提法、超声水提法及冻融水提法对鹿茸菇多糖提取率与多糖含量的影响。在单因素试验基础上,通过正交试验法优化鹿茸菇多糖提取工艺,并通过DPPH·和ABTS~+·清除试验探究该多糖的抗氧化活性。结果显示,水提法、酶解辅助水提醇沉法、微波水提法、超声水提法、冻融水提法多糖提取率分别为(4.63±0.40)%、(19.38±1.90)%、(7.32±0.47)%、(8.57±0.48)%、(11.46±0.50)%,多糖含量分别为(41.87±1.39)%、(77.03±1.76)%、(44.78±0.76%)、(42.57±1.36)%、(54.59±2.22)%,其中酶解辅助水提醇沉法效果最佳,故选用酶解辅助水提醇沉法提取鹿茸菇多糖。在此基础上,通过单因素与正交试验对酶解时间、酶浓度、固液比及提取次数4个关键参数进行优化,确定最佳工艺条件为提取3次,酶解时间150 min,酶浓度2.5%,固液比1∶20(g∶mL)。在此工艺下进行3次重复验证试验,鹿茸菇多糖含量分别为83.19%、82.08%和81.96%,多糖提取率分别为20.18%、21.34%和20.96%,工艺稳定可靠。体外抗氧化活性检测发现,由此制备的鹿茸菇多糖对DPPH·和ABTS~+·均表现出良好的自由基清除活性,且清除效果呈现剂量依赖关系,质量浓度为4.0 mg/mL的鹿茸菇多糖对两种自由基的清除率分别高达80.17%和88.42%。综上所述,本研究建立了一种高效的鹿茸菇多糖提取工艺,并证实该多糖具有显著的抗氧化潜力,为鹿茸菇在功能性食品中的开发与应用提供了重要依据。
本研究围绕香连化滞丸治疗犬湿热泄泻的潜在机制开展临床试验与多组学整合分析。临床试验选择患犬19只(中药组10只、西药组9只),另设健康对照组。治疗前两组患犬证候总积分具有可比性,治疗后两组患犬证候总积分均显著降低(P<0.05),中药组与西药组差异不显著,但中药组患犬中医证候分项积分降低更为明确;中药组总有效率(100.0%)显著高于(P<0.05)西药组(88.9%)。通过网络药理学从12味药中筛得多类活性成分,构建“成分-靶点-通路”网络,核心枢纽涉及AKT1、STAT3、TP53、CASP3、EGFR、MTOR等,富集于PI3K-Akt、TNF、炎症性肠病等通路。收集试验犬粪便样本进行16S rDNA测序,结果显示,患犬发病时肠道厚壁菌门等益生菌数量减少、机会致病菌数量增加;经中药干预后,患犬肠道布劳氏菌属、瘤胃球菌群、地中海杆菌属等厌氧发酵菌数量回升,群落结构趋于健康。非靶向代谢组学分析提示,犬湿热泄泻主要扰动脂质与脂肪酸代谢;中药干预可促进核苷/糖代谢与辅因子合成,提升短链脂肪酸及抗氧化相关小分子丰度,降低氧化应激标志物丰度。Spearman相关性分析显示,发酵益生菌与丁酸/戊酸/己酸、γ-谷氨酰-半胱氨酸、肌肽等呈正相关,与肠球菌属、不动杆菌属等呈负相关。综上,香连化滞丸可能通过“多成分-多靶点-多通路”协同,重塑肠道微生态与代谢网络并维护黏膜屏障,从整体上改善湿热泄泻患犬的临床症状。
本试验从野生药材品质常优于栽培品的现象出发,探究甘肃红芪主产区栽培地土壤与野生地土壤的肥力差异,旨在从土壤环境角度阐释“质优肥低”的成因,为通过仿生栽培提升红芪药材品质提供依据。采集甘肃红芪主产区武都、宕昌、定西等地的37份土壤样品,测定其全氮、全磷、全钾、有机质、速效磷、速效钾含量。采用主成分分析法(PCA)计算土壤肥力指数(IFI),并利用方差分析、相关分析及回归分析比较不同产区栽培地土壤与野生地土壤的肥力差异。结果显示,武都、宕昌及定西三地土壤IFI均值分别为0.263 0、0.276 2与0.264 0,均属中等肥力水平;栽培地土壤IFI均值(0.298)显著高于野生地(0.251),且二者全磷含量存在显著性差异(P<0.05);PCA分析表明,栽培地与野生地的土壤肥力结构无根本性差异。栽培活动虽能提升土壤全磷含量及整体肥力,但未改变土壤固有的肥力结构。野生红芪在长期适应中形成的低磷胁迫环境可能是驱动次生代谢产物积累,从而实现质优的关键。因此,在红芪人工栽培中,实施“控磷、稳氮钾”的施肥策略,模拟野生土壤的低磷环境,是提升药材品质的可行途径。
本研究旨在评价厚皮马拉色菌对中药单体及常用抗真菌药的敏感性,并筛选具有协同抑菌作用的联合用药方案。通过抑菌试验检测16种中药单体和抗真菌药对3株厚皮马拉色菌临床分离株(FS05、SZ06、GZ07)的抑菌效果;进一步以耐药性最强的SZ06株为对象,采用微量稀释法测定高度敏感药物对该菌的MIC和MBC,并通过棋盘稀释法评估药物联用效果。结果显示,厚皮马拉色菌对伊曲康唑、酮康唑、氟康唑等常用抗真菌药高度敏感,对大蒜素、肉桂醛、丁香酚和茴香醛等中药单体高度敏感;上述高度敏感药物对SZ06菌株的MIC值分别为0.25 mg/L、4.00 mg/L、128.00 mg/L、7.81 mg/L、15.60 mg/L、125.00 mg/L和62.50 mg/L。联合药敏试验表明,大蒜素与茴香醛、大蒜素与肉桂醛、大蒜素与丁香酚、茴香醛与肉桂醛联用时FICI均小于1,表现出协同作用,可显著延长细菌生长对数期。本研究表明,大蒜素与肉桂醛的联合用药方案对厚皮马拉色菌具有抑菌潜力,可为药物开发和防治该菌引起的皮肤感染提供参考。
蒸汽爆破辅助中药提取技术通过高温高压蒸汽渗透植物组织,瞬时泄压将内能转化为机械能,破坏细胞壁中纤维素、半纤维素与木质素的连接结构,形成多孔通道,从而促进有效成分溶出。其核心优势为提取效率高,绿色环保无化学残留,部分中药活性成分可发生有效转化,工艺适配性强,可实现“一爆多提”。蒸汽爆破的作用效果与中药的材质密切相关,适用于真菌类、根茎类、木质/果壳类、叶类等富含纤维、细胞壁致密的中药,不适用于含水量高或极度热敏感的中药。蒸汽爆破作为预处理手段,与超声提取、热水提取、响应面法等技术联用可产生协同效应,进一步提高提取效率并保护活性成分,为工业化应用提供多元路径。目前,该技术仍存在不同中药的蒸汽爆破工艺参数标准化不足、工业化设备研发滞后、基础研究不深入等问题。未来,应进一步加强基础研究,并围绕工艺标准化、设备智能化、应用场景等研究方向突破,促进蒸汽爆破技术成为推动中药产业绿色化、高效化、规模化发展的核心支撑技术之一,推动中药产业从粗放加工向精准制造转型,助力中药现代化发展。
犊牛腹泻导致犊牛生长性能下降、免疫力降低甚至死亡,部分人畜共患病原还威胁公共卫生安全,严重影响养殖效益。该病病因包括感染性因素与非感染性因素,前者包括细菌、病毒、寄生虫等,后者涉及自身免疫力低下、环境应激、营养失衡等,不同病因引发的临床症状存在差异。中兽药复方具备多靶点协同作用,广泛应用于犊牛腹泻的防治。研究表明,在饲料中分别添加蒲公英提取物、甘草提取物、生姜提取物、紫苏子提取物以及多种中药多糖均可降低养殖场犊牛腹泻的发病率。中兽药复方可通过调节免疫功能、修复肠道黏膜屏障、调控肠道微生态平衡等多种途径改善犊牛腹泻。未来,在中兽药研制方面可聚焦中兽医辨证论治和整体疗效研究,优化剂型并提高使用便捷性,贯彻防重于治的原则,加强饲养管理,以提高犊牛腹泻的综合防控效果。
优化凤眼草口服液的水提工艺参数,确定最佳提取工艺。以槲皮素、山柰酚含量及浸膏得率的总评归一值(OD值)为综合评价指标,通过单因素试验考察料液比、提取时间和回流次数对提取效果的影响,确定各因素的适宜范围。在此基础上,采用Box-Behnken中心组合设计原理,运用响应面分析法对凤眼草口服液的水提工艺进行优化。响应面分析结果显示,建立的数学模型决定系数R~2达0.990 3,校正决定系数R_(Adj)~2为0.977 9,两者高度接近,表明所建立模型拟合度良好。方差分析显示模型极显著(P<0.01),而失拟项不显著(P>0.05),进一步证实了模型的可靠性。得到最佳水提工艺条件为料液比1:17(g:mL),提取时间2 h,回流次数3次。在上述工艺条件下,口服液中槲皮素含量为1.07 mg/mL,山柰酚含量为0.17 mg/mL,浸膏得率为25.65%,OD平均值为0.940,RSD为1.2%。基于响应面法优化的凤眼草口服液水提工艺稳定可行,工艺参数科学合理,可为凤眼草制剂的进一步开发及工业化生产奠定基础。
本研究对香连化滞水丸剂开展工艺优化与质量评价,在传统处方(黄连、木香等12味药)基础上,以玉米淀粉为辅料并采用塑制法制丸,控制丸径约5 mm,经60℃热风干燥得均一圆整的水丸;通过性状与外观一致性、丸重与含水量等指标测定来评价成品稳定性,并采用显微鉴别与薄层色谱鉴别完成同一性鉴别(特征显微颗粒、Rf与显色均与对照品相符);采用C_(18)-HPLC外标法(λ=350 nm,乙腈与0.1%磷酸体积比为42∶58,含0.10%十二烷基磺酸钠),系统适用性达标,于t_R≈19.24 min检出与对照品一致的小檗碱峰,测得样品中盐酸小檗碱含量为4.0 mg/g,符合《中华人民共和国药典》(2020年版)规定(≥2 mg/g)。结果表明,本研究建立工艺可稳定制得适用于伴侣动物口服的香连化滞水丸,处方同一性明确,关键成分含量可控,成品质量均一且具备良好可制备性,具有推广应用前景。
建立高效液相色谱-波长切换法同时测定养血安神片中蟛蜞菊内酯、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)和大黄素的含量。采用Shim-pack GWS C_(18)色谱柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL/min;柱温35℃;通过二极管阵列检测器切换不同波长进行检测:蟛蜞菊内酯(351 nm)、二苯乙烯苷(320 nm)、大黄素(254 nm)。结果显示,3种成分分离度良好,线性关系(r>0.999)、精密度(RSD<2%)、重复性(RSD<2%)及加样回收率(95.32%~102.00%)均符合要求。该方法快速准确、重复性好,适用于养血安神片多指标质量评价。
本研究旨在建立一种可同时测定生地消渴丸中葛根素、盐酸巴马汀与盐酸小檗碱含量的高效液相色谱(HPLC)方法。试验采用Welchrom~?C_(18)色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,粒径5μm),以乙腈和0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.5)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL,检测波长260 nm。结果表明,3种成分均显示出良好的线性关系,葛根素线性范围为14.916~149.160μg/mL,盐酸巴马汀线性范围为4.602~46.020μg/mL,盐酸小檗碱线性范围为27.776~277.760μg/mL,各成分的相关系数r均高于0.999;加样回收试验中(样本量n=9),三者的平均回收率分别为100.2%、99.7%和100.6%,相对标准偏差(RSD)分别为0.76%、1.06%和1.02%。本方法操作简便、分析快速,并具有良好的精密度与灵敏度,适用于生地消渴丸的内在质量评价与控制。
本研究旨在确定鲫鱼摄入大黄芩鱼泡腾片后吸收的主要化合物及其药动学特征。将鲫鱼药浴在512 mg/L的大黄芩鱼泡腾片溶液中,48 h内尾静脉采血,建立高效液相色谱法标定和检测血浆中该药主要化合物种类及浓度,采用药代动力学软件DAS 2.0分析鲫鱼血浆中化合物的药动学特征。结果显示,鲫鱼血浆中检测到大黄芩鱼泡腾片的主要化合物为黄芩苷、大黄素,这2种化合物的血药浓度-时间曲线关系符合一级吸收一室模型,黄芩苷在鲫鱼体内吸收半衰期(t_(1/2ka))为(0.91±0.16)h,消除半衰期(t_(1/2))为4.64 h,达峰时间(T_(max))为3.00 h,峰浓度(C_(max))为0.114 mg/L,平均驻留时间(MRT)为4.89 h;大黄素在鲫鱼体内的t_(1/2ka)为(0.47±0.11)h,t_(1/2)为1.96 h,T_(max)为1.00 h,C_(max)为0.105 mg/L,MRT为3.44 h。鲫鱼药浴大黄芩鱼泡腾片溶液后,入血主要化合物为黄芩苷和大黄素,且在鲫鱼体内的主要药动学特征为吸收迅速、达峰时间较短、消除比较快。
本研究旨在建立测定乳酸乳头消毒剂中L-乳酸含量的高效液相色谱方法。采用C_(18)色谱柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm),以磷酸-乙腈溶液为流动相进行等度洗脱,检测波长210 nm,柱温35℃,流速1.0 mL/min,进样量20μL,通过专属性考察、线性关系考察、检测限测定、定量限测定、准确度考察、精密度考察和耐用性验证等进行方法学考察。在上述色谱条件下,乳酸乳头消毒剂中L-乳酸的分离度良好且无干扰,在0.099 6~1.992 0 mg/mL质量浓度范围内线性关系良好(r>0.999),检测限与定量限分别为0.01 mg/mL、0.03 mg/mL。按照外标法以峰面积计算,L-乳酸的平均回收率为99.3%,RSD<1.0%;平均重复性为99.8%,RSD<0.5%;中间精密度RSD<0.5%;稳定性RSD<1.0%;耐用性中流动相、流速和柱温出现微小变化或更换色谱柱时,L-乳酸含量基本不变。由试验结果发现,本方法具有简单、快速、易操作等特点,适用于乳酸乳头消毒剂中L-乳酸含量的测定,具有回收率高和稳定性好等特点。
系统比较水蒸气蒸馏法与二氧化碳超临界流体萃取法提取蝉翼藤中挥发性成分差异及其体外抗氧化活性。采用GC-MS技术鉴定2种提取方法所得挥发性成分,并以DPPH·及ABTS~+·自由基清除能力评价提取物抗氧化活性。结果显示,水蒸气蒸馏法鉴定出13种化合物,占总挥发性成分的60.05%,主要成分为苯甲醛、2-甲烯基丁内酯及3-氟苯乙腈;二氧化碳超临界流体萃取法鉴定出16种化合物,占总挥发性成分的81.39%,主要成分为β-蒎烯、异丁香烯与β-石竹烯。2种方法提取的共有成分为甘菊环、左旋樟脑等,2种提取方法所得挥发性成分均表现出明显的DPPH·及ABTS~+·自由基清除活性。研究结果可为蝉翼藤挥发性成分的提取工艺选择、质量控制及后续活性开发提供依据。
现代养殖环境下,畜禽常因饲养管理不当、久病耗伤等因素,出现脾胃虚弱、清阳不升等证候,补中升阳恰是解决此类“虚”“陷”病证的关键治则。笔者围绕补中升阳治则核心,系统探讨补中益气汤、升阳益胃汤、黄芪内托散3个方剂的临床应用差异与适配病例,为精准施治提供参考。三方均以黄芪为君药奠定补中升阳基础,但组方思路与主治侧重存在明显区别。补中益气汤配伍人参、白术健脾益气,佐以升麻、柴胡引阳上行,主要针对脾胃气虚、清阳不升所致的久泻、脱肛、子宫脱垂等症状,以补而升之改善整体气虚下陷状态。升阳益胃汤在补气基础上增加黄连、半夏清热和胃,兼顾胃中湿热,适用于脾胃气虚兼胃热上扰的胃脘痞满、阴虚胃热,体现升阳与清胃并举。黄芪内托散则配伍当归、川芎活血通络,加皂刺、金银花清热解毒,托毒外出,用于气虚不能托毒的疮疡中后期,通过补中升阳以托邪。临床应用需紧扣气虚为本、兼证为标的原则,气虚无兼夹者首选补中益气汤,气虚兼胃热者择升阳益胃汤,气虚兼疮疡脓腐不净者用黄芪内托散。三者的差异化应用,既丰富了补中升阳治法的临床实践,也为中医辨证论治中“同法异方”的精准性提供了实例支撑。
中兽医学是我国传统医学的重要组成部分,在动物疾病防治、绿色养殖及畜产品品质提升等领域发挥着至关重要的作用。河北农业大学中兽医学实习课程旨在培养动物医学专业学生的中兽医药实践能力与创新精神,针对传统课程教学中存在的教学内容滞后专业前沿、能力培养弱于产业需求、评价维度偏离课程目标三大痛点,教学团队实施了系统化的产教融合课程教学改革。首先,构建校企协同育人机制,组建由高校教师与企业专家组成的导师团队,拓展课程校外实习基地;其次,优化实习教学内容与资源,重构形成中兽药组方、中兽药制备和产业实践三大板块,促进“教学-创新-产业”的有机融合;然后,创新实习教学模式,运用项目式教学方法,形成“理论-实践-研创”进阶式培养;最后,完善评价机制,以教学目标为导向,建立多元化、多维度评价体系。通过课程改革,有效保障了中兽医学实习课程教学质量,学生实践能力与行业需求的匹配度显著提升,学生对运用中兽医药的自信心显著增强,课程教学探索可为相关课程的教学改革与实践提供参考。